国产又粗又长又黄又猛-欧美欧美日韩综合一区天-极品尤物av丝袜美腿在线观看-欧洲专区一区二区三区

熱門搜索: 肌酸激酶MB型同工酶(CK-MM)質(zhì)控樣品 抗血漿鑒別試劑盒 甲種胎兒球蛋白抗原 重組核心鏈霉親和素 2(不帶標(biāo)簽) 重組鏈霉親和素(r-ScSA)(NC膜專用) 重組鏈霉親和素(帶His標(biāo)簽) 羊抗人視-黃醇結(jié)合蛋白多克隆抗體 大鼠白細(xì)胞介素1β(IL-1β)試劑盒(ELISA) 人堿性成纖維細(xì)胞生長因子ELISA試劑盒 1%豚鼠紅細(xì)胞 2%雞紅細(xì)胞 1%雞紅細(xì)胞 重組人線粒體核糖體蛋白S2(MRPS2) 重組人蛋白酶體激活物亞基1(PSME1)蛋白 重組人肝癌衍生生長因子相關(guān)蛋白3 重組人FAM83A蛋白

PRODUCT CLASSIFICATION

產(chǎn)品分類

技術(shù)文章/ Technical Articles

您的位置:首頁  /  技術(shù)文章  /  感受態(tài)細(xì)胞的電轉(zhuǎn)化過程

感受態(tài)細(xì)胞的電轉(zhuǎn)化過程

更新時間:2013-05-26      瀏覽次數(shù):2190

        zui近,上海信帆生物科技有限公司在進(jìn)行了一項大腸桿菌電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的實驗。實驗過程操作規(guī)范順利,得出的結(jié)果良好。

實驗所需試劑:國產(chǎn)細(xì)胞菌株、培養(yǎng)基、10%甘油、DNA細(xì)胞

*天:
1. 將適合菌株(如XL1-Blue, DH5α)置于LB或其他營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基上,在37°C下過夜培養(yǎng)
2. 高溫滅菌大的離心瓶(250-500ml)以備第二天搖瓶用
3. 準(zhǔn)備幾瓶滅菌水(總量約1.5升),保存于冷凍室中以備第二天重懸浮細(xì)胞用

第二天:
4. 轉(zhuǎn)移0.2-1ml過夜培養(yǎng)物至裝有500ml LB(或其他營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基)的1-2升擋板搖瓶中
5. 37°C下劇烈振蕩培養(yǎng)2-6小時
6. 定時監(jiān)控O.D.600值(培養(yǎng)1小時后每半小時測定一次)
7. 當(dāng)O.D.600值達(dá)到0.5-1.0時,從搖床中取出搖瓶,置于冰上冷卻至少15分鐘(需要的話這種方式可以存放培養(yǎng)液數(shù)小時)
8. 細(xì)胞在4°C 5000g下離心15分鐘,棄上清液(如需要,沉淀可在4°C的10%甘油中保存一兩天)
9. 用滅菌的冰水重懸浮細(xì)胞。先用渦旋儀或吸液管重懸浮細(xì)胞于少量體積中(幾毫升),然后加水稀釋至離心管的2/3體積。
10. 照上面步驟重復(fù)離心,小心棄去上清液
11. 照上面步驟用滅菌的冰水重懸浮細(xì)胞
12. 離心,棄上清液
13. 用20ml滅菌的、冰冷后的10%甘油重懸浮細(xì)胞 14. 照上面步驟離心,小心棄去上清液(沉淀可能會很松散)
15. 用10%甘油重懸浮細(xì)胞至zui終體積為2-3ml
16. 將細(xì)胞按150μl等份裝入微量離心管,于-80°C保存

轉(zhuǎn)化方法:
1. 在冰上解凍電感受態(tài)細(xì)胞添加1-10μl DNA ,冰上培育約5分鐘
2. 添加1-3μl DNA ,冰上培育約5分鐘
3. 轉(zhuǎn)移DNA/細(xì)胞混合物至冷卻后的2mm電穿孔容器(無泡)中
4. 加載P1000,準(zhǔn)備好300μl LB 或 2xYT
5. 對電穿孔容器進(jìn)行脈沖(200 歐姆, 25μFd, 2.5 千伏)(檢查時間常數(shù),應(yīng)該在3以上)
6. 立即添加300μl 的LB或2xYT至電穿孔容器中
7. 37°C下培養(yǎng)細(xì)胞40分鐘至1小時以復(fù)原
8. 轉(zhuǎn)移細(xì)胞至適當(dāng)?shù)倪x擇培養(yǎng)基上培養(yǎng) 

 

微信掃一掃

郵箱:1170233632@qq.com

傳真:021-51870610

地址:上海市顧戴路2988號B幢7樓

Copyright © 2025 上海信帆生物科技有限公司版權(quán)所有   備案號:滬ICP備13019554號-1    技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)

TEL:13764793648

掃碼加微信
国产中文字幕久久黄色片| 国产麻豆一线二线三线| 欧美区一区二区在线观看| 亚洲国产成人av毛片国产| 冬爱琴音一区二区中文字幕| 一区二区三区亚洲国产| 欧美二区视频在线观看| 精品一区二区三区人妻视频| 黄色片一区二区三区高清| 亚洲内射人妻一区二区| 国产人妻精品区一区二区三区| 亚洲一区二区欧美在线| 男女激情视频在线免费观看| 国产一区二区在线免费| 国产精品内射视频免费| 亚洲欧美一二区日韩高清在线| 视频一区二区 国产精品| 国产日韩欧美在线播放| 亚洲国产另类久久精品| 日本男人女人干逼视频| 亚洲国产成人一区二区在线观看| 色丁香一区二区黑人巨大| 亚洲精品偷拍视频免费观看| 美日韩一区二区精品系列| 亚洲一区二区久久观看| 国产午夜精品亚洲精品国产| 少妇被粗大进猛进出处故事| 国产综合一区二区三区av| 国产黑人一区二区三区| 男人和女人草逼免费视频| 黑鬼糟蹋少妇资源在线观看| 日韩精品综合免费视频| 欧美偷拍一区二区三区四区| 午夜国产福利在线播放| 又色又爽又无遮挡的视频| 国产原创中文av在线播放| 黄色激情视频中文字幕| 亚洲天堂精品1024| 一区二区日本一区二区欧美| 国产二级一级内射视频播放| 欧美色欧美亚洲日在线|