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熒光定量PCR檢測(cè)(Real-time PCR,QPCR)

熒光定量PCR檢測(cè)(Real-time PCR,QPCR)
服務(wù)介紹:熒光定量PCR是通過(guò)熒光染料(SYBR Green)或熒光標(biāo)記的特異性的探針,對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤,實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過(guò)程,結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析,計(jì)算待測(cè)樣品模板的初始濃度??梢杂糜跈z測(cè)mRNA/lncRNA/circRNA的基因表達(dá)水平。每個(gè)樣本默認(rèn)做3個(gè)復(fù)孔的技術(shù)重復(fù)。

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  • 更新時(shí)間:2024-12-05
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詳細(xì)介紹

熒光定量PCR檢測(cè)(Real-time PCR,QPCR)

服務(wù)介紹:熒光定量PCR是通過(guò)熒光染料(SYBR Green)或熒光標(biāo)記的特異性的探針,對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤,實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過(guò)程,結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析,計(jì)算待測(cè)樣品模板的初始濃度??梢杂糜跈z測(cè)mRNA/lncRNA/circRNA的基因表達(dá)水平。每個(gè)樣本默認(rèn)做3個(gè)復(fù)孔的技術(shù)重復(fù)。

名稱

規(guī)格

熒光定量PCR檢測(cè)(Real-time PCR,QPCR)

/基因/樣

  實(shí)驗(yàn)流程:

取材-RNA提取逆轉(zhuǎn)錄成cDNA-引物設(shè)計(jì)合成-QPCR擴(kuò)增-數(shù)據(jù)分析-出報(bào)告

送樣運(yùn)輸要求:

1. 樣品處理

a) 動(dòng)物組織:常規(guī)組織100mg,脂肪組織,結(jié)締組織,纖維化組織適當(dāng)增加。將組織-剪切成合適大小后(建議組織塊長(zhǎng)寬高均不大于0.5 cm),然后迅速完-全浸泡于5~10倍體積的RNAsolidTM試劑中。(注意:已浸入RNAsolidTM試劑中的組織經(jīng)平衡一段時(shí)間后,可從溶液中取出,切成更小的組織塊,再重新放回RNAsolidTM試劑中;有些比較弱的液體滲透性組織如骨頭等,不適合用RNAsolidTM試劑進(jìn)行RNA保護(hù)。)

b) 植物組織:新鮮的葉、果肉、種子最少100 mg。將嫩葉,嫩莖組織切成合適的大?。ńㄗh長(zhǎng)寬高均不大于0.5 cm)后,然后迅速完-全浸泡于5~10倍體積的RNAsolidTM試劑中。(注意:某些植物組織天生具有的屏障,如葉子表面的蠟層可阻礙RNAsolidTM試劑的滲透,對(duì)于此類組織,通常需破壞這些屏障層以允許溶液的浸透。)

c) 細(xì)胞等樣本:收集不少于10^6個(gè)細(xì)胞沉淀(用PBS清洗1-2次),干冰運(yùn)輸。

d) 酵母、細(xì)菌等樣本:離心棄上清,收集一定量的菌體沉淀,干冰運(yùn)輸。

e)全血:最少1 mL新鮮血液EDTA抗凝管,干冰運(yùn)輸。

f)血清或血漿:最少1 mL,干冰運(yùn)輸。

g) 提取好的外泌體:最少500ul,干冰運(yùn)輸。

h) RNA樣品: OD260/280為1.8-2.0,濃度≥100 ng/μL,體積≥20μL,干冰運(yùn)輸。

i)cDNA:cDNA原液≥20 μL,干冰運(yùn)輸。 

2. 樣品保存及運(yùn)輸

加入有RNAsolidTM試劑的樣本可在37℃保存1~2天,2天以后部分組織中的RNA會(huì)開(kāi)始降解。室溫(25℃)穩(wěn)定保存1周,不會(huì)有明顯的RNA降解發(fā)生。大部分樣品置于RNAsolidTM試劑中,4℃條件下可穩(wěn)定保存1個(gè)月,不會(huì)有明顯的RNA降解發(fā)生。長(zhǎng)期存放可先將保存在RNAsolidTM試劑中的樣本4℃浸透過(guò)夜,然后將RNAsolidTM試劑吸出棄去,再將樣本放入-20℃或-80℃長(zhǎng)期穩(wěn)定保存3~5年。

 


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